你知道選購色譜柱的時(shí)候要考慮哪些因素嗎？
色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分，相當(dāng)于人體的“心臟”。根據(jù)自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱，需要考慮不同參數(shù)將會(huì)造成什么影響，比如粒徑、酸堿性、極性和分子量大小等。
只有了解影響分析柱性能的因素，才能結(jié)合目標(biāo)分析物的性質(zhì)、需要達(dá)到的分析效果及實(shí)驗(yàn)室條件來選擇適合的色譜柱。
一、硅膠基質(zhì)填料
1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠(silica)以及其它具有極性官能團(tuán)，如胺基和氰基的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如正己烷，氯仿，二氯甲烷等。
2、反向色譜 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分zui先被沖洗出，而極性較弱的組分在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有c18、c8、c4等。
二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要優(yōu)點(diǎn)是在ph值為1-14均可使用。相對(duì)于硅膠基質(zhì)的c18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合特填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。
三、其它無機(jī)填料 其它hplc的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化，由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于在hplc流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類柱可在任何ph與溫度下使用。氧化鋁也可以用于hplc。氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可以在ph高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于hplc。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用ph1-14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行之中。
柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，即相同的塔板數(shù)或分離能力，但是柱長(zhǎng)更短，以縮短分析時(shí)間。另外，可以彩用低粘度的溶劑做流動(dòng)相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。
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2、反向色譜 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì)，表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分zui先被沖洗出，而極性較弱的組分在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反向填料有c18、c8、c4等。
二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要優(yōu)點(diǎn)是在ph值為1-14均可使用。相對(duì)于硅膠基質(zhì)的c18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合特填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。
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