raw264.7細胞轉(zhuǎn)染效率低怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實驗者的一道難題，特別對于比較大的質(zhì)粒dna的轉(zhuǎn)染更是困難；我們實驗室用美國zeta life公司advanced dna rna轉(zhuǎn)染試劑貨號ad600150轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞整理了一套優(yōu)化方案希望對大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助。
下圖是用美國zeta life公司advanced dna rna轉(zhuǎn)染試劑貨號ad600150在6孔板轉(zhuǎn)染8000bp左右的pegfp-c1r到raw264.7細胞的熒光和細胞明場圖片。
提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細胞條件如下
一、質(zhì)粒dna準備
1、質(zhì)粒dna濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素），我用qiagen試劑盒除去的內(nèi)毒素
二、操作流程
1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板，細胞匯合度在70%左右，再進行轉(zhuǎn)染。
2、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒dna與zeta life公司advanced dna rna貨號ad600150轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘。
3、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面，我后期會進一步摸索此條件）。
4、轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液。
5、質(zhì)粒dna轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率
三、注意事項：
1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,fugene 6、fugene hd、effectene等；
2細胞培養(yǎng)zeta life z7181-500胎牛血清，gibco的dmem;
四、美國zeta life公司advanced dna rna轉(zhuǎn)染試劑信息：
產(chǎn)品名稱
貨號
規(guī)格
數(shù)量
報價
advanced dna rna 轉(zhuǎn)染試劑
ad600025
0.25ml
1
1590
advanced dna rna 轉(zhuǎn)染試劑
ad600050
0.5
1
2390
advanced dna rna 轉(zhuǎn)染試劑
ad600075
0.75
1
2890
advanced dna rna 轉(zhuǎn)染試劑
ad600150
1.5ml
1
4490
advanced dna rna 轉(zhuǎn)染試劑
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5ml
1
電詢
advanced dna rna 轉(zhuǎn)染試劑
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10ml
1
電詢

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