細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、dna復(fù)制及修復(fù)、信號通路等是測定dna合成情況研究方向的常用方法之一,用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物(brdu、edu),兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。
brdu免疫檢測需要變性dna后才能與抗體結(jié)合,
edu因為其炔羥基團可以與一些熒光染料發(fā)生“click”化學反應(yīng),無需變形,從而將細胞標記上熒光,因此應(yīng)用更廣泛。
edu和brdu檢測區(qū)別
brdu檢測增殖細胞的特點及原理
brdu(5-bromodeoxyuridine)是一種假核苷酸,它被用來檢測細胞增殖。它可以通過與正常dna堿基結(jié)合,從而替換掉正常dna。brdu在細胞分裂時被復(fù)制到dna中,并在細胞內(nèi)存在一段時間,因此它可以用來指示哪些細胞正在增殖。
brdu檢測的基本原理是:在細胞增殖過程中,brdu會被復(fù)制到dna中,并與dna堿基結(jié)合。這些dna含有brdu的細胞可以通過免疫組化或fish技術(shù)被檢測出來。
brdu的檢測可以用于研究細胞的生長和分裂,也可以用于檢測癌癥細胞的增殖和活動。例如,brdu可以用來檢測腫瘤細胞中的dna損傷,以及化療藥物對腫瘤細胞的作用。
brdu也可以用于檢測免疫系統(tǒng)中的細胞,例如檢測t細胞增殖以及抗原激活的活性t細胞。此外,brdu也可以用來檢測神經(jīng)細胞的發(fā)育。
brdu檢測是一種有效的檢測細胞增殖的方法,它可以用來研究細胞的生長、分裂和發(fā)育,以及腫瘤細胞的活動和化療藥物的作用。
edu檢測增殖細胞的特點及原理
edu(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,5‐乙炔基‐2′脫氧核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物,其化學結(jié)構(gòu)特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與5位c原子相連的甲基被乙炔基取代,在s期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復(fù)制的dna鏈中,
edu在細胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的dna分子中,基于edu與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測處于s期的細胞百分數(shù)。熒光染料可以同edu發(fā)生“click”化學反應(yīng)(點擊法),從而將增殖的細胞標記上熒光??捎糜诩毎上?、流式、細胞示蹤、dna損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等,edu亦適用于活體注射,穩(wěn)定,對活體沒有副作用。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(brdu)檢測方法相比,edu檢測法更簡單、更快速、更準確,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。
edu和brdu檢測區(qū)別見下表
edu
brdu
分子量大小
252.22 g·mol?1
307.098 g·mol?1
標記檢測方式
化學反應(yīng)(點擊法)
免疫反應(yīng)
是否影響其他標記
不影響
影響
dna是否變性
否
是
標記檢測時長
≤2.5 h
過夜
檢測靈敏度
高
一般
edu檢測的優(yōu)點:
1、更簡單:僅需edu孵育;無需抗原抗體反應(yīng),基于小分子化學反應(yīng)的檢測方法簡單高效,反應(yīng)僅需要幾分鐘;
2、更靈敏:無需抗體,檢測染料僅brdu抗體的1/500,很容易擴散,即便是單個增殖細胞也能準確檢測;
3、更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟,只需2.5 h;
4、更準確:無需dna變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細胞核邊緣清晰完整;
5、更兼容:允許與多種抗體、熒光染料同時標記;對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記,能夠同時檢測細胞其他性狀特征;
6、應(yīng)用性廣,細胞成像、流式、細胞示蹤、dna損傷修復(fù)檢測、病毒增殖活性檢測,適用于各種動物細胞檢測,對植物細胞亦適用。
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