薄層色譜法優(yōu)缺點(diǎn)介紹以及薄層色譜法操作步驟
(1)定義薄層色譜，或稱(chēng)薄層層析，薄層層析是把支持物均勻涂布于支持板(常用玻璃板，也可用滌綸布等)上形成薄層，然后用相應(yīng)的溶劑進(jìn)行展開(kāi)。從而對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。
(2)分類(lèi)薄層層析可根據(jù)作為固定相的的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。
(3)方法的優(yōu)缺點(diǎn)
①優(yōu)點(diǎn)：操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易等特點(diǎn)，同時(shí)展開(kāi)速率快，一般僅需15～20min；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有
0.01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類(lèi)的腐蝕性顯色劑。
②缺點(diǎn)：對(duì)生物高分子的分離效果不甚理想。
(3)操作步驟
①薄層板制備：除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為
0.2～o.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110℃烘30min，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過(guò)透射光和反射光檢視)。
②點(diǎn)樣：除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2.ocm，樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
③展開(kāi)：展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.ocm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中)，密封室蓋，待展開(kāi)至規(guī)定距離(一般為10-15cm)，取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。
④顯色：取出的薄層板，立即噴灑顯色劑，使其顯色，計(jì)算rf值或使之出現(xiàn)各種有色的斑點(diǎn)，與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照比較，可確定其成分。
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(3)方法的優(yōu)缺點(diǎn)
①優(yōu)點(diǎn)：操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易等特點(diǎn)，同時(shí)展開(kāi)速率快，一般僅需15～20min；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有
0.01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類(lèi)的腐蝕性顯色劑。
②缺點(diǎn)：對(duì)生物高分子的分離效果不甚理想。
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①薄層板制備：除另有規(guī)定外，將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為
0.2～o.3mm)，取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110℃烘30min，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過(guò)透射光和反射光檢視)。
②點(diǎn)樣：除另有規(guī)定外，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊2.ocm，樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。
③展開(kāi)：展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，可在室中加入足夠量的展開(kāi)劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開(kāi)劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.ocm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中)，密封室蓋，待展開(kāi)至規(guī)定距離(一般為10-15cm)，取出薄層板，晾干，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測(cè)。
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