蛋白質(zhì)含量測定方法有哪些？
蛋白質(zhì)含量測定實驗可以用于測定蛋白質(zhì)濃度和檢測所提取的蛋白質(zhì)含量，那么蛋白質(zhì)含量測定方法有哪些呢？讓我們一起來看看吧！
一、folin—酚試劑法
這種蛋白質(zhì)測定法是zui靈敏的方法之一。過去此法是應用zui廣泛的一種方法，由于其試劑的配制較為困難，近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin-酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復合物。folin-酚試劑中的磷鉬酸鹽-磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。
folin-酚試劑法最早由lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測定的基本步驟。以后在生物化學領(lǐng)域得到廣泛的應用。這個測定法的優(yōu)點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要精確控制操作時間，標準曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質(zhì)較多。對雙縮脲反應發(fā)生干擾的離子，同樣容易干擾lowry反應。而且對后者的影響還要大得多。酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。濃度較低的尿素（0.5%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯yi酸（0.5%），乙醇（5%），yi醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液對顯色無影響，但這些物質(zhì)濃度高時，必須作校正曲線。含硫酸銨的溶液，只須加濃碳酸鈉-氫氧化鈉溶液，即可顯色測定。若樣品酸度較高，顯色后會色淺，則必須提高碳酸鈉-氫氧化鈉溶液的濃度1～2倍。
二、考馬斯亮藍法
考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據(jù)蛋白質(zhì)可與考馬斯亮藍g-250 定量結(jié)合。當考馬斯亮藍 g-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變?yōu)?595nm。在考馬斯亮藍 g-250 過量且濃度恒定的情況下，當溶液中的蛋白質(zhì)濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 g-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉(zhuǎn)變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉(zhuǎn)變有一定的數(shù)量關(guān)系。一般情況，當溶液中的蛋白質(zhì)濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 g-250 顯色法來測定溶液中蛋白質(zhì)的含量。
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二、考馬斯亮藍法
考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據(jù)蛋白質(zhì)可與考馬斯亮藍g-250 定量結(jié)合。當考馬斯亮藍 g-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合后，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變?yōu)?595nm。在考馬斯亮藍 g-250 過量且濃度恒定的情況下，當溶液中的蛋白質(zhì)濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 g-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉(zhuǎn)變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉(zhuǎn)變有一定的數(shù)量關(guān)系。一般情況，當溶液中的蛋白質(zhì)濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 g-250 顯色法來測定溶液中蛋白質(zhì)的含量。
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